Мушаххасоти
Тартиби санҷиш ва тафсир
ҚАДАМИ 1 Тартиби санҷиш
1.1 Омода кардани маҳлули шустан
Wконсентратсия wмоеъи хокистари:Пеш аз истифода, маҳлули шустушӯй бояд ба ҳарорати хонагӣ (20-25 дараҷа) барқарор карда шавад ва баробар ҷунбонда шавад, то якхела шавад. Сипас маҳлули консентратсияи шустушӯиро 20 маротиба бо оби тозашуда (масалан, 5 мл маҳлули консентратсияи шустушӯй ба 95 мл оби соф илова карда мешавад) маҳлул кунед, хуб омехта кунед ва моеъи шустушӯиро дар ҳарорати 2-8 дараҷа барои 7 рӯз нигоҳ доштан мумкин аст.
1.2 Тайёр кардани намуна
① Тамоми хуни ҳайвонот гирифта, дар 4000 rpm барои 10 дақиқа центрифуга карда шуд ва супернатант ҷамъоварӣ карда шуд. Зардоб инчунин метавонад ба таври табиӣ бидуни гемолиз коагулятсия карда шавад.
② Зардобро, ки бояд санҷида шавад, 50 маротиба дар лавҳаи маҳлули хуноба омехта кунед (масалан: 3ул хуноба барои санҷидашуда илова кунед, то ба ҳалкунандаи намунаи 147ул илова кунед).
Эзоҳ: Назорати манфӣ ва мусбӣ набояд ҳал карда шаванд
1.3 Тартиби санҷиш
①Маркази ферментии Microplate -ро гиред (мувофиқи шумораи намунаҳо, мумкин аст чанд маротиба ҷудо ва истифода шавад), 100ул зардоби маҳлулшударо ба тамғаи ферментии Microplate илова кунед, ҳар кадоме барои назорати манфӣ ва назорати мусбат ду чоҳ насб кунед ва мутаносибан ба чоҳи реаксия 100ул илова кунед. Намунаро дар чоҳ оҳиста ҷунбонда, бо истифода аз плёнкаи мӯҳр барои пӯшидани табақ ва дар ҳарорати 37 дараҷа барои 30 дақиқа инкубатсия кунед.
②Плёнкаи плитаи мӯҳркунандаро кушоед, маҳлулро дар табақ хуб ҷунбонед, ба ҳар як чоҳ 300 мкл моеъи шустани консентратсияи корӣ илова кунед ва сипас моеъро дар чоҳ партоед. Қадамҳои дар боло зикршударо 5 маротиба такрор кунед ва дар ниҳоят дар коғази абсорбенти тоза хушк кунед.
③Конъюгат ферментҳои маҳлулшуда: Конъюгати ферментро (80×) 80 маротиба маҳлул кунед (масалан: 10ul консентрат ферментҳои конъюгатӣ + 790ul намуна, миқдори мушаххаси зарурӣ аз рӯи шумораи намунаҳои санҷишӣ ҳисоб карда мешавад), хуб омехта кунед ва як тараф гузоред.
④Ба ҳар як чоҳ 100 мкл конъюгати фермент илова кунед, табақро пӯшонед ва дар ҳарорати 37 дараҷа барои 30 дақиқа инкубатсия кунед.
⑤Шустушӯи лавҳаи ферментӣ, амалиёти мушаххас ҳамон тавре ки дар боло оварда шудааст ② аст.
⑥Ба ҳар як чоҳ маҳлули 100 мкл субстрат илова кунед, табақро пӯшонед ва 10 дақиқа дар 37 дараҷа дуртар аз рӯшноӣ инкубатсия кунед.
ҚАДАМИ 2 Шарҳи натиҷа
Қимати OD450-и ҳар як чоҳ дар хонандаи микропласти 96-чоҳ хонда шуд.
2.1 Тасдиқ Қимати миёнаи OD450nm назорати манфӣ <0,25 буд ва арзиши миёнаи OD450nm назорати мусбат Бузургтар аз ё ба 0,6 баробар буд, натиҷаҳои таҷрибавӣ эътибор доранд. Дар акси ҳол, санҷиш бояд такрор карда шавад.
2.2 Усули ҳисоб
Барои ҳар як намуна, S/P-ро бо истифода аз намунаи ислоҳшуда ва арзишҳои назоратӣ ҳисоб кунед:
2.3 Шарҳи натиҷаҳо
Вақте ки S/P <0.2, он манфӣ ҳисобида мешавад.
Вақте ки S/P > 0,3 бошад, он мусбат арзёбӣ мешавад.
Вақте ки 0,2 камтар ё баробар ба S/P Камтар аз 0,3 ё баробар аст, он шубҳанок ҳисобида мешавад ва тавсия дода мешавад, ки пас аз як ҳафта интихоб ва санҷиш такрор карда шавад.
Садо Ояндасоз: маҷмӯаи ташхиси антителоҳои вируси ринотрахеити гови сироятии элиза, Чин маҷмӯаи ташхиси антителоҳои сироятии ринотрахеити гови элиза таъминкунандагон, истеҳсолкунандагон, завод
